葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測儀的操作分前期準(zhǔn)備、測量設(shè)置、正式測量和數(shù)據(jù)后處理四個核心步驟,不同型號儀器操作略有差異,整體流程一致:
一、測量前準(zhǔn)備工作
儀器校準(zhǔn)與狀態(tài)檢查
初次使用或長期未使用后,需按照儀器說明書完成校準(zhǔn),避免基準(zhǔn)漂移;同時檢查電池電量是否充足,連接線路牢固,用無塵軟布清潔測量探頭/傳感器窗口,保證光學(xué)系統(tǒng)清潔。
樣品預(yù)處理
選取同一生育期、健康無病害的功能葉片,擦干葉片表面露水、灰塵,保證葉片干凈干燥;如需測量暗適應(yīng)參數(shù),需提前用暗適應(yīng)夾將葉片避光處理15-30分鐘,讓光合系統(tǒng)充分弛豫。
二、參數(shù)設(shè)置與儀器調(diào)試
根據(jù)測量目標(biāo)選擇測量模式:常用模式包括誘導(dǎo)曲線測量、光響應(yīng)曲線測量、快速測量等,不同模式對應(yīng)不同光合參數(shù)獲取需求。
設(shè)置基礎(chǔ)測量參數(shù):選擇匹配的激發(fā)光源(一般為紅光或藍(lán)光),根據(jù)需求設(shè)置測量時間、飽和脈沖強度、光強梯度等基礎(chǔ)參數(shù),確認(rèn)數(shù)據(jù)存儲路徑。
開展暗校正:部分儀器需要先進(jìn)行暗讀數(shù)校正,遮擋傳感器探頭獲得基線值,為后續(xù)測量提供參考基準(zhǔn)。
三、正式測量流程
固定樣品:將預(yù)處理好的葉片平整固定在測量位置,保證葉肉區(qū)域覆蓋測量窗口,讓測量頭和葉片緊密貼合,避免外界光線泄漏干擾測量結(jié)果。
啟動測量:按下測量按鍵,儀器會按照預(yù)設(shè)程序依次發(fā)射測量光、飽和脈沖和光化光,自動記錄熒光信號變化:
暗適應(yīng)測量:會自動測量初始熒光Fo、最大熒光Fm,計算出PSII最大光化學(xué)效率Fv/Fm,這是常用的植物健康評價參數(shù)。
光適應(yīng)測量:會連續(xù)測量穩(wěn)態(tài)熒光Fs、光適應(yīng)最大熒光Fm'等參數(shù),進(jìn)一步計算實際光化學(xué)效率ΦPSII、電子傳遞速率ETR等參數(shù)。
記錄數(shù)據(jù):測量完成后儀器會自動顯示所有參數(shù)結(jié)果,確認(rèn)結(jié)果穩(wěn)定后保存數(shù)據(jù),如需測量多個樣品,重復(fù)上述固定、測量步驟即可,建議對同一片葉多點測量取平均值提升精度。
四、數(shù)據(jù)后處理
葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測儀測量全部完成后,將儀器中存儲的數(shù)據(jù)導(dǎo)出到電腦,使用儀器配套的專業(yè)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,比如繪制熒光動力學(xué)曲線、擬合光響應(yīng)曲線、計算目標(biāo)光合參數(shù),完成后續(xù)統(tǒng)計分析。
操作注意事項:
避免在陽光直射、高溫高濕的環(huán)境下測量,外界強光會干擾測量結(jié)果,同時會縮短儀器使用壽命。
對同一測點重復(fù)測量時,需要間隔數(shù)秒,避免葉片受壓導(dǎo)致數(shù)據(jù)漂移。
使用后及時清潔探頭,長期存放時要保持電池電量在50%左右,每3個月充放電一次,存放在干燥通風(fēng)環(huán)境中。