葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測(cè)儀的操作分前期準(zhǔn)備、測(cè)量設(shè)置、正式測(cè)量和數(shù)據(jù)后處理四個(gè)核心步驟,不同型號(hào)儀器操作略有差異,整體流程一致:
一、測(cè)量前準(zhǔn)備工作
儀器校準(zhǔn)與狀態(tài)檢查
初次使用或長(zhǎng)期未使用后,需按照儀器說明書完成校準(zhǔn),避免基準(zhǔn)漂移;同時(shí)檢查電池電量是否充足,連接線路牢固,用無塵軟布清潔測(cè)量探頭/傳感器窗口,保證光學(xué)系統(tǒng)清潔。
樣品預(yù)處理
選取同一生育期、健康無病害的功能葉片,擦干葉片表面露水、灰塵,保證葉片干凈干燥;如需測(cè)量暗適應(yīng)參數(shù),需提前用暗適應(yīng)夾將葉片避光處理15-30分鐘,讓光合系統(tǒng)充分弛豫。
二、參數(shù)設(shè)置與儀器調(diào)試
根據(jù)測(cè)量目標(biāo)選擇測(cè)量模式:常用模式包括誘導(dǎo)曲線測(cè)量、光響應(yīng)曲線測(cè)量、快速測(cè)量等,不同模式對(duì)應(yīng)不同光合參數(shù)獲取需求。
設(shè)置基礎(chǔ)測(cè)量參數(shù):選擇匹配的激發(fā)光源(一般為紅光或藍(lán)光),根據(jù)需求設(shè)置測(cè)量時(shí)間、飽和脈沖強(qiáng)度、光強(qiáng)梯度等基礎(chǔ)參數(shù),確認(rèn)數(shù)據(jù)存儲(chǔ)路徑。
開展暗校正:部分儀器需要先進(jìn)行暗讀數(shù)校正,遮擋傳感器探頭獲得基線值,為后續(xù)測(cè)量提供參考基準(zhǔn)。
三、正式測(cè)量流程
固定樣品:將預(yù)處理好的葉片平整固定在測(cè)量位置,保證葉肉區(qū)域覆蓋測(cè)量窗口,讓測(cè)量頭和葉片緊密貼合,避免外界光線泄漏干擾測(cè)量結(jié)果。
啟動(dòng)測(cè)量:按下測(cè)量按鍵,儀器會(huì)按照預(yù)設(shè)程序依次發(fā)射測(cè)量光、飽和脈沖和光化光,自動(dòng)記錄熒光信號(hào)變化:
暗適應(yīng)測(cè)量:會(huì)自動(dòng)測(cè)量初始熒光Fo、最大熒光Fm,計(jì)算出PSII最大光化學(xué)效率Fv/Fm,這是常用的植物健康評(píng)價(jià)參數(shù)。
光適應(yīng)測(cè)量:會(huì)連續(xù)測(cè)量穩(wěn)態(tài)熒光Fs、光適應(yīng)最大熒光Fm'等參數(shù),進(jìn)一步計(jì)算實(shí)際光化學(xué)效率ΦPSII、電子傳遞速率ETR等參數(shù)。
記錄數(shù)據(jù):測(cè)量完成后儀器會(huì)自動(dòng)顯示所有參數(shù)結(jié)果,確認(rèn)結(jié)果穩(wěn)定后保存數(shù)據(jù),如需測(cè)量多個(gè)樣品,重復(fù)上述固定、測(cè)量步驟即可,建議對(duì)同一片葉多點(diǎn)測(cè)量取平均值提升精度。
四、數(shù)據(jù)后處理
葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測(cè)儀測(cè)量全部完成后,將儀器中存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)導(dǎo)出到電腦,使用儀器配套的專業(yè)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,比如繪制熒光動(dòng)力學(xué)曲線、擬合光響應(yīng)曲線、計(jì)算目標(biāo)光合參數(shù),完成后續(xù)統(tǒng)計(jì)分析。
操作注意事項(xiàng):
避免在陽光直射、高溫高濕的環(huán)境下測(cè)量,外界強(qiáng)光會(huì)干擾測(cè)量結(jié)果,同時(shí)會(huì)縮短儀器使用壽命。
對(duì)同一測(cè)點(diǎn)重復(fù)測(cè)量時(shí),需要間隔數(shù)秒,避免葉片受壓導(dǎo)致數(shù)據(jù)漂移。
使用后及時(shí)清潔探頭,長(zhǎng)期存放時(shí)要保持電池電量在50%左右,每3個(gè)月充放電一次,存放在干燥通風(fēng)環(huán)境中。